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Pruebas de residuos de antibióticos: qué son y cómo cumplir mejor con la legislación brasileña

¿Qué son los falsos positivos, los falsos negativos y los falsos infractores?

Sin duda, la preocupación por la presencia de sustancias contaminantes que no forman parte de la composición de la leche est presente en el cotidiano de los productores de este alimento. 


Por lo tanto, la cadena de producción de leche está constantemente monitoreando los residuos de medicamentos veterinarios, con el fin de garantizar la seguridad alimentaria de los consumidores. 


Anteriormente, hablamos en otros artículos del blog sobre la presencia de aditivos y sustancias que aumentan el volumen o la durabilidad de la leche. En la agenda de hoy hablaremos de los diferentes tipos de métodos existentes, sus fundamentos de detección, y nos adentraremos en un tema que puede causar mucha controversia: los residuos de antibióticos y la interpretación de sus resultados. A saber:

  • Positivos;
  • Negativos;
  • Falsos positivos;
  • Falsos negativos;
  • Falso-violador.


Bem, a presença de resíduos de medicamentos, como antiparasitários e antimicrobianos (antibióticos), pode ser comum no leite produzido, uma vez que estes medicamentos têm seus usos permitidos.


Sin embargo, los montos no deben exceder los valores preestablecidos en la legislación brasileña. Estos límites se denominan Límites Máximos de Residuos (MRL en portugués, o “MRL - Maximum Residues Level” en inglés).


Por lo tanto, para monitorear estos valores, inicialmente se realizan pruebas de detección rápida para rastrear estas sustancias y comprender si están presentes en la leche. Estas pruebas se denominan cualitativas, donde se determina su presencia o ausencia.


De esta forma, repasaremos los métodos de análisis existentes y una cronología de su evolución.

Monitoreo de residuos y violaciones falsas

Bueno, hasta ahora hemos visto que la legislación brasileña tiene sus parámetros y niveles de aceptación para estos residuos de antibióticos, pero ¿cómo se realiza ese seguimiento?


Los métodos de seguimiento se clasifican en dos tipos, cribado y confirmación. Es decir, se realiza en dos etapas.


En el primero, se realiza el cribado mediante pruebas cualitativas o semicuantitativas, que pueden ser de los siguientes tipos:

  • Inhibición microbiana o microbiológica
  • Inmunológico 
  • Basado en quimiorreceptores



Método del halo de inhibición del crecimiento microbiológico

El primer método utilizado fue el de inhibición del crecimiento microbiano, que se basaba en el principio de inhibir el crecimiento de bacterias en una placa de petri, previamente sembrada con una cantidad conocida de bacterias, a la que se le añadía un volumen de leche y si existía la presencia de residuos de antibióticos por encima de cierta concentración, habría inhibición del crecimiento de bacterias, al medir el tamaño de la inhibición, se sabría si la concentración de antimicrobianos está por encima del límite máximo permitido.


El resultado de este método tarda de 12 a 24 horas en estar listo, lo que hace inviable su uso en análisis de recepción y liberación de leche para descarga. Estos métodos se utilizaron en la industria alimentaria hasta principios de la 1970 década, y no identifican el tipo de antimicrobiano y la respuesta depende de la sensibilidad de las bacterias utilizadas al antimicrobiano presente en la muestra. Además, son incapaces de identificar el tipo de antibiótico presente en la muestra y el resultado es presencia o ausencia, sin diferenciar la familia de antimicrobianos.


Métodos Elisa en microplacas

Con la evolución de la inmunoquímica a finales de la 1980 década, apareció la técnica de elisa -“ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas”- análisis por una enzima ligada a un sustrato inmune- se crearon métodos que podían identificar una sustancia específica, en un De manera efectiva, cada análisis de elisa identificaba específicamente una familia de antimicrobianos y sin interferencia de otros compuestos, este tipo de análisis significó un gran salto cualitativo, ya que ahora era posible saber exactamente qué antimicrobiano estaba presente en la leche, sin interferencia de otros contaminantes. . A pesar de que el tiempo de análisis es más corto que el del método microbiológico (alrededor de dos horas), los principales problemas de esta técnica fueron la dificultad en el manejo de las microplacas, el número de pasos del proceso (5 pasos), problemas operativos y analíticos. errores, además del mayor costo. Este tipo de método estaba prácticamente restringido a centros de investigación y universidades.


Métodos de inmunocromatografía de flujo lateral

Este tipo de método foi introduzido no mercado mundial no início da década de 1990, e começou a ser utilizado no Brasil, introduzido pelo diretor técnico da Somaticell, quando este desempenhava as funções de gerente da qualidade de um grande laticínio em São Paulo, em 1994. 


En este escenario, existe una categoría de pruebas que identifica la presencia de estos residuos sin cuantificar valores. Entonces, incluso si están por debajo del límite máximo de la legislación, pueden apuntar a resultados positivos. 

En estos casos, incluso con una pequeña presencia de residuos de antibióticos, la leche puede considerarse apta para el consumo, ya que respeta los límites de la legislación. 


Hemos separado el tema en los siguientes temas para facilitar la lectura y comprensión de todo el escenario:

  • La terapia antibiótica
  • ¿Por qué hay residuos de antibióticos presentes?
  • A legislação Brasileira sobre o uso de antibióticos
  • Monitoreo de residuos
  • Precauciones al realizar las pruebas
  • Métodos cualitativos para la detección de residuos de antimicrobianos
  • Las falsas infracciones y las BPA de las pruebas cualitativas
  • Pruebas cuantitativas

La terapia antibiótica 

Los antibióticos se utilizan ampliamente en el ganado bovino para el tratamiento de diversas enfermedades infecciosas, como la mastitis. Estas sustancias químicas tienen la función de matar o inhibir el crecimiento de microorganismos que causan patologías en humanos o animales.


Así, a la hora de detectar la presencia de estos microorganismos en el rebaño, el veterinario puede utilizar la más diversa gama de antibióticos disponibles para el ganado, dependiendo del tipo de bacteria o parásito que afecte al animal.


El uso de antibióticos es un arma muy eficaz para el control y erradicación de enfermedades, cuando se utiliza de forma adecuada y bajo prescripción médica. Cuando el tratamiento se realiza de manera irresponsable, sin control veterinario, puede desencadenar varios problemas de salud pública.


Entre ellos, el más famoso es la resistencia a los antimicrobianos. Según la OMS (Organización Mundial de la Salud), este es uno de los mayores desafíos de salud pública en el mundo. Por lo tanto, los profesionales veterinarios son los responsables de controlar el tratamiento de los animales y las pruebas de residuos de antibióticos en la leche para aumentar aún más la seguridad y la calidad de la materia prima.


En este escenario, las pruebas de residuos de antibióticos son métodos de control utilizados para identificar la presencia de residuos. De esta forma, es posible tener un mayor control sobre la presencia de estas sustancias que interfieren en la calidad de la leche producida.


Los principales tipos de pruebas disponibles en el mercado se pueden dividir en pruebas rápidas o pruebas de detección, que arrojan resultados cualitativos (positivos o negativos), y pruebas confirmatorias, que implican un proceso más largo.


Principales clases de antimicrobianos 

Entre los antibióticos más utilizados en bovinos, podemos mencionar las siguientes clases como los más utilizados en rebaños:

  • Beta-lactámicos: Penicilina, Ampicilina, Amoxicilina, Cloxacilina, Ceftiofur y otras Cefalosporinas;
  • Tetraciclinas: Tetraciclinas, Oxitetraciclinas y Clortetraciclinas;
  • Aminoglucósidos: Estreptomicina, Neomicina, Gentamicina;
  • Macrólidos: eritromicina, tilosina, tilmicosina;
  • Sulfonamidas y Trimetoprina: Sulfametazina, Sulfadimetoxina, Sulfatiazol y más de 15 otros compuestos;
  • Quinolonas: Enrofloxacina, Norfloxacina, Ciprofloxacina, Ofloxacina, Rosoxacina, Sparfloxacina, Floroxacina, Pefloxacina, Aminofloxacina, Lomefloxacina, y más compuestos.
  • Anfenicoles: Cloranfenicol, Florfenicol, Tiamfenicol;


¡Pero atención! Incluso si las clases son las mismas, no use antibióticos adecuados para la medicina humana en el ganado. Todavía no hay estudios sobre el período de descarte. Luego, siga las instrucciones de su veterinario en su propiedad. 

¿Por qué se forman residuos de antibióticos?

Para el tratamiento de cualquier infección bacteriana o parasitaria que utilice antimicrobianos, independientemente de la vía de administración, pueden quedar residuos de estos fármacos en la leche, incluso en pequeñas cantidades.

Las vías de administración más comunes en bovinos son intramamaria, intrauterina, oral, muscular oa través de la piel. Los antibióticos se absorben en el torrente sanguíneo después de la aplicación y luego pueden pasar a la leche. 


Por lo general, la presencia de antibióticos se asocia con las siguientes condiciones:

  • Uso extra-empaquetado, inapropiado o ilegal;
  • Falta de capacitación de los empleados;
  • Falta de registros de vacas tratadas;
  • Fracasos del tratamiento;
  • Fallas en posología, dosis y forma de administración;
  • Dilución de antibióticos en leche;
  • Fallas en la gestión;
  • Incumplimiento del plazo de gracia;
  • Número de descendientes, cuanto más, menor es el metabolismo;
  • Producción de leche, a menor productividad, mayor concentración de residuos en la leche;
  • No deseche la leche de las vacas tratadas.

Legislación brasileña sobre residuos de antibióticos y falsas infracciones

A legislação brasileira é bastante cuidadosa no quesito de monitoramento dos produtos de fonte Agrícola e da Pecuária.  Dessa forma, o Plano Nacional de Controle de Resíduos em Produtos de Origem Animal (PNCRC) estabelece para leite os Limites Máximos de Resíduos (LMR). 


Os parâmetros de LMR são descritos no Decreto 9013 de 2017. Neste documento Normativo está descrito o Subprograma de Monitoramento, de Investigação e Exploratório, para execução do PNCRC.


Según el Decreto 9013, en su artículo 248, leche normal es aquella que no contiene residuos de productos de uso veterinario y contaminantes por encima de los límites máximos establecidos. Además, este decreto también describe el Plan de Muestreo y los procedimientos para la recolección, preparación, empaque y envío de muestras para análisis. 


Para el control actual, cada año el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Abastecimiento (Mapa) publica el alcance de analitos que necesitan monitoreo, así como el número de muestras que la casa matriz necesita recolectar.

Precauciones al realizar las pruebas

El primer error que puede ocurrir al realizar una prueba cualitativa es hacer el análisis justo después del ordeño. Esto puede generar falsos positivos, debido a los inhibidores naturales que están presentes y activos en la leche por un período de hasta 3 horas. 


Por lo tanto, para evitar que esto ocurra, la muestra debe calentarse a 80 °C durante 5 minutos y luego refrigerarse. Esto inactiva los inhibidores naturales y evita un resultado falso positivo.


Pero como mencionamos anteriormente, estas pruebas suelen realizarse horas después, ya en el tanque de los camiones, llegando a la industria láctea. 

Formas de detectar CMP

Hemos visto hasta ahora que es sumamente importante tener cuidado con la refrigeración durante el período de transporte de la muestra de leche, ante la presencia de microorganismos psicotróficos.


Es necesario tener este control previo, antes de buscar las razones del aumento de CMP en la leche, ya sea por crecimiento bacteriano o por la adición de suero.


Tendo os cuidados prévios, a melhor forma de detecção das quantidades CMP (caseinomacropeptídeo) é através do método HPLC, sigla em inglês para cromatografia líquida de alto desempenho.


A través de este análisis, es posible percibir la calidad de la leche y evaluar su capacidad para convertirla en productos derivados como el queso y el yogur, que dependen de la caseína intacta.

Métodos cualitativos y semicuantitativos para la detección de residuos de antimicrobianos

En Brazil existen varios kits de detección de residuos de antimicrobianos. Sin embargo, es necesario seleccionar las pruebas de detección más adecuadas para su situación, de acuerdo con los límites de detección de residuos de antimicrobianos.


En el Brazil, El Somaticell Diagnósticos trabaja con kits diseñados para atender el mercado brasileño, con las mayores protecciones en términos de capacidad de detección de drogas, cobertura de familias detectadas, con un 100% de las necesidades descritas en el PNCRC – Plan Nacional de Control de Residuos y Contaminantes – del MAPA. , para garantizar que las queserías reciban leche con residuos por debajo de la legislación, pero sin desechar la leche buena por leche contaminada.


Com os Kits 2 em 1 da Somaticell, é possível realizar o monitoramento adicional previsto na IN76 e na IN77, com coberturas de 90% ou 95%, ou 100% das drogas antimicrobianas comercializadas para vacas leiteiras.

 

Los análisis realizados para identificar Beta-lactámicos y Tetraciclinas logran alcanzar una eficiencia del 100%. Así, de acuerdo a las necesidades del cliente, los kits pueden ser adecuados para realizar el diagnóstico en el rebaño.

 

En cuanto a la metodología, los kits Somaticell Los diagnósticos se basan en Elisa (Enzyme Linked Immunosorbent Assay), fabricado bajo los más estrictos estándares de calidad y cumpliendo con los requisitos de límites de detección exigidos por el MAPA – Ministerio de Agricultura- ANVISA – Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria - y el Codex Alimentarius.

 

De esta forma, Somaticell diagnostics puede, a través de estos kits, identificar Beta-Lactámicos, Tetraciclinas, Sulfonamidas y Fluorquinolonas, Aminoglucósidos, Macrólidos y Anfenicois. Somaticell comercializa soluciones combinadas o individuales para cada una de las familias de antibióticos comercializadas en Brazil.

Interpretación de resultados mediante ensayos cualitativos y semicuantitativos

Las pruebas cualitativas para la detección de residuos de antibióticos pueden identificar la presencia de estas sustancias incluso en cantidades inferiores a las establecidas por el LMR. 


¿Qué sucede cuando estas pruebas de detección detectan residuos? Significa que la prueba detectó un valor de residuos de antibióticos en el límite de detección del método, que puede estar cerca del LMR (Límite Máximo de Residuos), o por debajo del LMR.


Usando solo estas herramientas, la leche podría desecharse automáticamente, ¿verdad? 


El protocolo de disposición de leche no apta para el consumo humano debe acreditarse con la certeza inequívoca de que la concentración en el producto está efectivamente por encima de la legislación. Para estos casos, algunos países establecen un procedimiento oficial para ayudar a las industrias en la aplicación de este protocolo, lo que lamentablemente no es el caso en Brazil.


Para mayor claridad del tema, utilizaremos las definiciones de la FIL-IDF sobre el tema:


FALSOS POSITIVOS:

  • Definición: el método da el resultado como positivo, pero el analito, la sustancia objetivo, no está presente;
  • En este caso, tenemos un resultado falso positivo, ya que no hay residuo en la muestra analizada;
  • Principales causas:

       - Leche anormal - leche agria;

       - Alta concentración de sólidos en la muestra, ej. suero concentrado;

       - células somáticas altas;

       - Rica en grasas.


FALSOS NEGATIVOS

  • Definición: el método da el resultado como negativo, pero el analito, la sustancia objetivo, está presente y por encima de la norma;
  • Cuando un método declara que detecta principios activos, pero el resultado negativo no significa que los residuos presentes por encima de la norma (legislación brasileña) estén ausentes;
  • Principales causas:

       - Método mal dimensionado para el propósito

       - Ejemplo 1: el método microbiológico que tiene como objetivo detectar múltiples fármacos está validado solo para beta más tetra y dará la falsa impresión de leche segura, incluso con el fármaco presente en la leche por encima del LMR.

       - Ejemplo 2: método para betalactámicos que detecta cefalexina a 500ppb, siendo la norma 100 ppb, es decir, un resultado negativo no garantiza el cumplimiento de la norma.


FALSAS VIOLACIONES

  • Definición: La prueba detecta residuo de antibiótico, el residuo sí está presente, el resultado se clasifica como positivo, pero el nivel de residuo de antibiótico está por debajo de la legislación brasileña;
  • Causa: Este es el caso típico de la capacidad de detección por debajo del LMR, que se debe a la capacidad de reacción entre el anticuerpo/enzima y que depende de las reacciones cruzadas entre el anticuerpo y el antibiótico y de las estereointerferencias químicas entre las diferentes moléculas de los antibióticos y los receptores (anticuerpo/enzima), que pueden acoplarse de forma diferente y provocar así detecciones no lineales entre los diferentes componentes de cada familia;
  • Exemplo: No kit 2in1 Beta+ Cefalexina+ Teracilcinas temos a detecção de Penicilina a 2 ppb (50% do LMR) e do Ceftiofur a 80ppb (80% do LMR), demonstrando a ocorrência de reações cruzadas diferentes entre as diversas moléculas e o anticorpo.

Pruebas cuantitativas 

Para una determinación exacta y precisa de la concentración de residuos de medicamentos veterinarios, la metodología cuantitativa indicada en Brazil y en otros países es HPLC MS/MS (cromatografía líquida de alta resolución con detector masa/masa), que logra cuantificar las cantidades al nivel de ppbs (parte por billón o mg/l por ejemplo). Resulta que este tipo de equipos es difícil de operar, ya que requiere técnicos altamente especializados, alta inversión, poca capacidad para el número de análisis y mucho tiempo de respuesta, lo que hace que en Brasil, por ejemplo, tengamos pocos centros capaces de llevar realizar este tipo de análisis, ubicados en regiones alejadas de las grandes cuencas lecheras.


Como resultado, tenemos un tiempo promedio para realizar una muestra cuantitativa de alrededor de 15 días, desde la recolección hasta el resultado. En la práctica esto significa que este tipo de análisis solo sirve como análisis fiscal, o para programas gubernamentales y estudios académicos.


¿Pero cómo resolver la cuestión de condenar la leche? Con los métodos de Somaticell, es posible, mediante la aplicación de métodos de análisis de la infracción, conociendo la droga involucrada en la infracción, algunos aspectos de la caracterización de la muestra analizada y el método aplicado, poder estimar con un alto grado de certeza si la muestra es por encima de la legislación brasileña y si la leche debe ser condenada, por violarla.


De esta forma, usted que es cliente de Somaticell podrá beneficiarse de este servicio exclusivo para aplicar, o no, una sanción de condena de leche, previa aplicación del método específico.

¿Qué podemos concluir sobre las falsas violatorias?

Cuando hablamos de antibióticos, una cosa que debe quedar clara es que aún no se han fabricado medicamentos que el cuerpo del ganado pueda absorber por completo, por lo que los residuos. Por tanto, siempre que se administran estos fármacos, es posible encontrar rastros de su eliminación en la leche.


Entonces, en base a este principio, existe una tolerancia legislativa, que permite un Límite Máximo de Residuos (LMR).


Dentro de este universo, tenemos el tema de las falsas violas, que tienen cierta cantidad de antimicrobianos, sin embargo, están por debajo del LMR, y por lo tanto aptos para el consumo.


Pues si la legislación establece que es posible mantener la seguridad alimentaria incluso en presencia de estos antibióticos, entonces se desecha menos leche. 


Pero para evitar estos descartes es necesario que los productores hagan un uso consciente de estos antimicrobianos, respeten el tiempo de eliminación y recuerden siempre que el límite máximo de residuos establecido se aplica para cada animal y el análisis en tanques o camiones de recolección es una mera liberalidad de la autoridad sanitaria, para establecer un punto de control operacionalmente factible.


Para a detecção de resíduos de todos os antibióticos vendidos no Brasil e permitidos para uso pelo MAPA, conte com a Somaticell para o fornecimento dos kits de detecção. Nós temos uma cobertura completa das demandas técnicas e com o suporte técnico para ajudar você a aplicar a legislação da melhor forma possível e com a melhor relação benefício/custo. 


Para saber mais informações sobre nossos serviços, entre em contato com a gente e fale com um de nossos especialistas!

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